（來源：醫學界）
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人表皮生長因子受體2（HER2）與乳腺癌患者的強侵襲性腫瘤相關，常導致不良預後。因此，HER2陽性狀態的診斷及其靶向治療對乳腺癌患者至關重要。免疫組織化學（IHC）和熒光原位雜交（FISH）是臨床診斷乳腺癌HER2狀態的傳統方法。近年來隨著分子診斷技術的進步，定量實時逆轉錄PCR（RT-qPCR）等新技術已通過系列評估驗證，或可對傳統診斷方法形成有效補充。一篇綜述詳細探討了以RT-qPCR為代表的分子診斷技術進展，旨在助力深入理解分子機制以開發先進分子工具[1]。本文特此整理關鍵內容，以饗讀者。
當前HER2診斷策略
HER2基因擴增伴隨mRNA及蛋白表達水平的升高。其變異可從DNA、RNA或蛋白層面進行評估。基於既往曲妥珠單抗療效研究數據，美國食品藥品監督管理局已批准採用IHC和FISH檢測乳腺癌HER2狀態。IHC通過抗體檢測HER2蛋白表達水平，FISH則利用DNA探針通過熒光檢測系統計算HER2基因拷貝數。其他檢測方法包括酶聯免疫吸附試驗、微陣列、測序、RT-qPCR以及循環腫瘤細胞HER2檢測等（表1）。
表1 當前HER2陽性乳腺癌檢測方法
HER2檢測技術面臨的挑戰
上述分子檢測技術已全球廣泛應用於臨床檢測HER2的DNA、RNA及蛋白水平。基於RT-PCR的基因表達定量是HER2檢測的重要方法，可為臨床樣本回顧性分析提供價值。但RT-qPCR技術存在特定挑戰：福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織中的RNA易降解，且內參基因的選擇會顯著影響結果準確性。
RT-qPCR診斷技術最新研究進展
多項研究已評估RT-qPCR在乳腺癌分子分型及HER2過表達檢測中的應用潛力。
Park等[2]評估了RT-qPCR作為IHC和FISH輔助檢測方案的潛力。後者雖現行通用，但耗時長、成本高且對靈敏度與準確性要求嚴苛。研究對兩年內收集的乳腺癌組織樣本進行分析顯示，RT-qPCR與IHC/FISH相比特異性達89.8%，敏感性為93%。表明HER2基因mRNA定量可作為傳統IHC/FISH檢測的替代方案。
Wang等[3]開發了巢式RT-qPCR法檢測臨床樣本中HER2 mRNA過表達。結果顯示，經IHC/FISH預先鑒定的患者樣本中，該方法的真陽性率為92%，假陽性率為2%。RT-qPCR與FISH、IHC的一致性分別達到92.1%和87.2%。該方法被證實在HER2檢測中可靠，有助於優化HER2陽性乳腺癌患者的曲妥珠單抗治療。
Liable等（2016年）[4]對MammaTyper試劑盒進行系列分析評估。該體外診斷試劑盒通過RT-qPCR檢測乳腺癌亞型mRNA表達，以解決IHC分型不一致性問題，並且可同步檢測MKI67、PGR、ESR1及HER2表達。綜合分析顯示，該檢測在33.5個定量循環內呈線性，兩種平台間變異極小；單標誌物檢測一致性超過94%；且RNA提取流程的變化不影響結果。研究表明MammaTyper能通過分析擾動實現驗證，標誌物檢測變異極小，可作為基於分子分析的乳腺癌分型先進工具。
EL Hadi等[5]評估了7個基因作為內參基因在乳腺癌FFPE組織HER2基因mRNA標準化中的適用性，並進行RT-qPCR與IHC/FISH的一致性分析。研究中先檢測乳腺癌細胞系HER2表達，再評估7個基因作為RT-qPCR內參的潛力，最終證實RT-qPCR可作為有效的輔助檢測手段指導乳腺癌治療與管理。
Wang等（2017年）[6]採用RT-qPCR技術分析FFPE組織樣本中HER2基因表達，使用3種不同內參基因進行相對定量分析。結果顯示：與IHC相比靈敏度達96.7%，與FISH相比為92.4%；進一步發現HER2過表達與分子亞型、PR狀態、ER狀態、組織學類型及TNM分期顯著相關。表明RT-qPCR可作為HER2 mRNA過表達篩查的輔助工具。
Zoppoli等[7]比較了IHC、FISH、qPCR與RT-qPCR在乳腺癌HER2狀態檢測中的效能，並對不一致病例通過Western blot直接檢測HER2蛋白水平。FISH與qPCR總體一致率為94.1%，RT-qPCR與FISH為90.81%。值得注意的是，HER2蛋白分析與RT-qPCR的相關性高於FISH，表明在HER2蛋白過表達患者中，RT-qPCR檢測效能優於FISH。
小結
分子診斷技術的不斷創新為HER2陽性乳腺癌的精準診療體系奠定了堅實基礎。當前研究表明，以RT-qPCR為代表的分子檢測技術有望提升HER2狀態判讀的靈敏性與特異性，還有效彌補了傳統IHC/FISH方法在標準化程度和操作效率方面的局限性。未來，通過整合多組學數據與人工智慧分析框架，新一代分子診斷技術有望進一步推動HER2陽性乳腺癌的個體化治療策略優化。
參考文獻：
[1]Albanyahyati B, et al. Advances in Molecular Diagnostics and Targeted Therapeutic Approaches in HER-2 Positive Breast Cancer. Asian Pac J Cancer Prev. 2025;26(7):2277-2289. Published 2025 Jul 1.
[2]Park S, et al. Quantitative RT-PCR assay of HER2 mRNA expression in formalin-fixed and paraffin-embedded breast cancer tissues. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7:6752–9.
[3]Wang HY, et al. Evaluation of a quantitative RT-PCR assay to detect HER2 mRNA overexpression for diagnosis and selection of trastuzumab therapy in breast cancer tissue samples. Exp Mol Pathol. 2014;97:368–74.
[4]Laible M, et al. Technical validation of an RT-qPCR in vitro diagnostic test system for the determination of breast cancer molecular subtypes by quantification of ERBB2, ESR1, PGR and MKI67 mRNA levels from formalin-fixed paraffin-embedded breast tumor specimens. BMC Cancer. 2016;16:398.
[5]El Hadi H, et al. Development and evaluation of a novel RT-qPCR based test for the quantification of HER2 gene expression in breast cancer. Gene. 2017;605:114–22.
[6]Wang H-Y, et al. Clinical Usefulness of a One-Tube Nested Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction Assay for Evaluating Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 mRNA Overexpression in Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Breast Cancer Tissue Samples. Pathobiol J Immunopathol Mol Cell Biol. 2017;84:57–70.
[7]Zoppoli G, et al. Her2 assessment using quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction reliably identifies Her2 overexpression without amplification in breast cancer cases. J Transl Med. 2017;15:91.
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審批編號：CN-172266過期日期：2026-11-19
