臻和科技聯合同濟大學附屬上海市肺科醫院-周彩存教授團隊合作的研究成果發表於「Cancer Communications」，IF：15.283。本研究採用臻和朗蒂思產品進行多重免疫熒光(mIF)檢測。
PD-1抑製劑聯合化療已經成為局部晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)患者一線治療的新標準，但仍有近一半的患者無法從這種聯合治療中獲益。為進一步擴大PD-1抑製劑聯合化療方案的獲益人群，找到可靠的預測生物標誌物非常重要。然而，PD-L1表達和TMB等單一生物標誌物均不能預測聯合治療療效。因此，本研究通過檢測腫瘤免疫微環境生物標誌物的表達水平，在晚期NSCLC患者中，探討不同標誌物的合理組合對PD-1抑製劑聯合化療的療效預測價值。
研究概覽
患者情況
共納入144例初治的ⅢB-Ⅳ期非鱗狀NSCLC患者，其中77例接受PD-1抑製劑卡瑞利珠單抗聯合化療治療，67例僅接受化療治療，卡瑞利珠單抗聯合化療組患者的客觀緩解率(ORR)顯著高於單純化療組患者(59.7% vs 37.3%，P=0.007)。
樣本檢測
使用臻和朗蒂思產品，基於多重免疫熒光(mIF)技術對治療前的組織樣本免疫微環境生物標誌物(包括PDL1、CD8、CD68、CD4和FOXP3)進行檢測和分析。
表1 144例NSCLC患者臨床基線特徵
關鍵研究結果
卡瑞利珠單抗聯合化療組中應答者的CD8/PD-L1和CD68/PD-L1共表達水平顯著高於無應答者，在單純化療組中未見顯著差異。
本研究首先評估了卡瑞利珠單抗聯合化療組中應答者(CR+PR患者)和無應答者(SD+PD患者)的單一和共表達標誌物的表達水平(陽性細胞密度和陽性細胞百分比)與客觀緩解之間的相關性。
單一標誌物(PD-L1、 CD8、 CD68、 CD4、 FOXP3)
應答者的PD-L1陽性細胞密度 (P=0.013)和陽性細胞百分比(P=0.020)、CD8陽性細胞密度 (P=0.046)和CD68陽性細胞百分比(P=0.048)均顯著高於無應答者。而CD4和FOXP3的表達水平與客觀緩解無相關性(圖1-B)。
圖1-B 單一標誌物表達水平與治療療效的相關性
共表達標誌物(CD8/PD-L1 、CD68/PD-L1 、 CD4/FOXP3 、 CD8/CD68/PD-L1 、 CD4/FOXP3/PD-L1)
應答者的CD8/PD-L1和CD68/PD-L1陽性細胞密度和陽性細胞百分比顯著高於無應答者，而CD4/FOXP3、CD8/CD68/PD-L1和CD4/FOXP3/PD-L1的共表達水平在應答者和無應答者之間相似。
圖1-C 共表達標誌物表達水平與治療療效的相關性
卡瑞利珠單抗聯合化療組中，CD8/PD-L1或CD68/PD-L1高共表達水平患者的ORR顯著較高；CD8/PD-L1與CD68/PD-L1高共表達組患者的PFS、OS顯著改善。
接下來，本研究在卡瑞利珠單抗聯合化療組中評估了不同組合的共表達標誌物與臨床結局之間的相關性。結果顯示，高CD8/PD-L1和高CD68/PD-L1共表達水平具有更好的預測價值。
CD8/PD-L1共表達組
卡瑞利珠單抗聯合化療組中，高CD8/PD-L1共表達組患者(n=39)的ORR顯著高於低共表達組(n=38)(71.8% vs 47.4%, P = 0.029；圖2-B)；而在單純化療組中，CD8/PD-L1高、低共表達組的ORR相似(P > 0.05；圖2-B)。
註：高共表達組是被分析人群的陽性細胞百分比≥中位數水平；低共表達組是被分析人群的陽性細胞百分比＜中位數水平。
圖2-B 高、低水平CD8/PD-L1共表達患者治療反應之間的比較
在卡瑞利珠單抗聯合化療組中，高CD8/PD-L1共表達組患者的PFS(P=0.002；圖2-C)和OS(P=0.006；圖2-D)較低CD8/PD-L1共表達組患者顯著延長。在高CD8/PD-L1共表達組中，接受卡瑞利珠單抗聯合化療治療患者的PFS(P=0.003)和OS(P=0.032)較單純化療組患者顯著延長。而在低CD8/PD-L1共表達組中，接受不同治療方式患者的PFS和OS無明顯差異(圖2 C-D)。
圖2 C-D 高、低CD8/PD-L1共表達水平患者的PFS和OS比較
CD68/PD-L1共表達組
卡瑞利珠單抗聯合化療組中，高CD68/PD-L1共表達(n=39)患者也獲得了較好的ORR(69.2% vs 50.0%，P=0.085；圖3-B)，但未達到統計學意義；在單純化療組中，CD68/PD-L1高、低共表達組的ORR相似(P>0.05；圖3-B)。
圖3-B 高、低水平CD68/PD-L1共表達的患者治療反應之間的比較
卡瑞利珠單抗聯合化療組中，高CD68/PD-L1共表達患者的PFS(P=0.024；圖3-C)和OS(P=0.026；圖3-D)較低CD68/PD-L1共表達患者顯著延長。在高CD68/PD-L1共表達組中，接受卡瑞利珠單抗聯合化療治療患者的PFS(P=0.004；圖3-C)和OS(P=0.022；圖3-D)也明顯優於接受單純化療治療的患者；而在低CD68/PD-L1共表達組中，接受不同治療方式患者的PFS和OS無明顯差異(圖3 C-D)。
圖3 C-D 高、低CD68/PD-L1共表達水平患者的PFS和OS比較
此外，調整臨床病理特徵後，CD8/PD-L1和CD68/PD-L1共表達對卡瑞利珠單抗聯合化療組PFS和OS的預測價值仍具有統計學意義。
CD8/PD-L1或CD68/PD-L1高共表達組的TP53/KRAS共突變比例較高，在CD8/PD-L1共表達陽性組中發現了豐富的PI3K和細胞周期通路突變。
最後，本研究評估了CD8/PD-L1或CD68/PD-L1不同共表達水平的腫瘤突變特徵。結果顯示：在CD8/PD-L1或CD68/PD-L1高和低共表達組患者之間TP53或KRAS突變的發生率相似，但CD8/PD-L1或CD68/PD-L1高共表達組的TP53/KRAS共突變比例明顯高於低共表達組(均為13.0% vs 0.0%，P=0.023；圖4-A)。CNV分析結果顯示CD8/PD-L1陽性組染色體5p和8q呈顯著缺失，CD8/PD-L1陰性組染色體5p、7p和14q局部擴增(圖4-B)，CD68/PD-L1陽性組和陰性組在染色體8q、10q、12q和14q上觀察到明顯的CNV。另外，與陰性組相比， CD8/PD-L1陽性組中發現顯著豐富的PI3K(P=0.012；圖4-C)和細胞周期通路突變(P=0.021；圖4-D)，而CD68/PD-L1陽性組和陰性組之間這兩條通路未見差異(P＞0.05)。
圖4 CD8/PD-L1共表達陽性和陰性組的腫瘤突變特徵
小結
本研究主要探討了腫瘤免疫微環境生物標誌物PD-L1、CD8、CD68、CD4、FOXP3及其不同組合的表達水平在接受PD-1抑製劑聯合化療治療的局部晚期或轉移性NSCLC患者中的療效預測價值。
研究結果顯示
對卡瑞利珠單抗聯合化療有應答患者的CD8/PD-L1或CD68/PD-L1共同表達水平顯著較高。
在卡瑞利珠單抗聯合化療組中，CD8/PD-L1或CD68/PD-L1高共表達與PFS和OS延長顯著相關。
CD8/PD-L1或CD68/PD-L1高共表達的患者具有顯著更高的TP53/KRAS共突變比例，CD8/PD-L1共表達陽性的患者PI3K和細胞周期通路的突變更加豐富。
綜上所述，腫瘤免疫微環境標誌物的生物學合理組合，特別是CD8/PD-L1和CD68/PD-L1的共表達，可能成為局部晚期或轉移性NSCLC患者PD-1抑製劑聯合化療一線治療的預測生物標誌物，相關預測價值有待後續研究作進一步驗證。
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