用於細胞培養的胎牛血清以及其他血清中可能會存在以下種類的沉澱物:
1. 纖維蛋白:它是經常出現的較大的沉澱物,可以達到1-2mm,可以用肉眼觀察到。因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的,一些纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)在處理過程中仍然處於溶解狀態,當經過最後的過濾分裝後,就會在瓶中凝結出現纖維蛋白沉澱。 2. 磷酸鈣:它也是常見的一種沉澱物,通常會使血清出現渾濁,並且在37℃培養的時候會增加。這種沉澱物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由於布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認為是微生物污染。 3. 膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。他們也是血清中出現沉澱物的常見原因。 最常見的沉澱物,就是在血清融化過程中有時候會出現的沉澱,血清中包含絮狀沉澱是沉澱包含纖維蛋白和脂蛋白。要除去沉澱,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉澱在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議採用過濾的方法除去沉澱,因為沉澱會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉澱並加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動並加熱血清至37℃,沉澱會自然消失。 |
按如下操作可避免沉澱的產生:
(1)解凍血清/分裝凍存時,須規則搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生。 (2)勿將血清置於37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。 (3)血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。 |
血清出現沉澱是血清的正常特性,各大品牌的血清均有沉澱的出現,海星生物根據細胞培養多年經驗,血清沉澱的多少與血清的使用效果沒有必然關係。建議更換新批次血清的時候,取少量細胞進行測試培養,以確定是否影響後續細胞生長。
沉澱不是檢驗血清的硬指標,但為了實驗準確、實驗美觀、實驗便利,還是應該盡量減少沉澱的產生。掌握正確的血清解凍、使用方法,再加上一款品質穩定的優秀血清,對於細胞實驗來說,至關重要。
公眾號:海星生物科技
以上內容由海星生物(http://www.cas9x.com)提供
我們的服務:CRISPR/Cas9細胞基因編輯、載體構建/病毒包裝、分子診斷標準品/突變基因標準品/融合基因標準品、細胞穩轉/細胞干擾
我們的產品:HyCyte幹細胞/原代細胞/細胞株、三系誘導培養試劑、ClonePlus 專用培養基、基因編輯試盒、病毒現貨、細胞專用血清